近日,我院王琰博士与四川农业大学小麦研究所、英国洛桑研究所的科研人员,共同在植物科学领域主流期刊《The Plant Journal》(中国科学院1区TOP期刊)发表题为“Seed-type vacuolar processing enzymes recognize the 619th asparagine residue to posttranslationally cleave the HMW-GS 1Dy10-m619SN allele”的研究论文,系统解析了1Dy10-m619SN翻译后部分剪切的分子机制。该研究工作得到国家重点研发计划(2023YFD1200404)、国家自然科学基金(31971939)、四川省科技厅项目(2024ZYD0160、2024NSFSC1209)及英国生物技术与生物科学研究理事会项目(BB/X011033/1)的资助。
小麦加工品质改良是作物遗传育种领域的重要研究方向,对保障优质专用小麦生产具有关键价值。高分子量谷蛋白亚基(HMW-GS)约占种子储藏蛋白的 10%,是决定小麦加工品质的核心储藏蛋白类型。1Dy10 是公认的优质 HMW-GS,敲除 1Dy10 会弱化面团强度,不利于强筋小麦品质,但可增强面团延展性,有利于提升饼干品质。研究团队前期已报道小麦 HMW-GS 1Dy10 基因的等位变异 1Dy10-m619SN,发现其第 619 位氨基酸残基由丝氨酸(Ser)突变为天冬酰胺(Asn),导致 1Dy10-m619SN 翻译后在 619 位残基处部分剪切,进而提升饼干品质,且提升效果与敲除 1Dy10 相近。但 1Dy10-m619SN 翻译后部分剪切的分子机制此前尚未明确。
本研究首先采用 TurboID 邻近标记技术与 RNA-seq 方法,鉴定出液泡加工酶(Vacuolar Processing Enzymes,VPEs)是 1Dy10-m619SN 翻译后部分剪切的候选酶(图1)。提取水稻(Nipponbare和W379,其中W379为OsVPE1缺失突变体)与小麦不同发育时期种子的VPEs粗酶开展体外酶切实验,证实VPEs可特异性切割1Dy10-m619SN蛋白。进一步对小麦VPEs氨基酸序列进行系统发育分析,发现小麦存在两类种子型VPEs,即TaVPEI与TaVPEII;其中TaVPEI 可细分为TaVPEI-1、TaVPEI-2、TaVPEI-3三种亚型。上述VPEs亚型催化活性中心高度保守,但表达模式存在显著差异,其中TaVPEI-1的表达模式与 1Dy10-m619SN高度一致。亚细胞定位实验显示,TaVPEI(以TaVPEI-1-2A为研究对象)与TaVPEII(以TaVPEII-6A为研究对象)蛋白均定位于液泡,与 HMW-GS储藏位置部分重合,这一结果合理解释了1Dy10-m619SN仅发生部分翻译后剪切的现象(图2)。体外实验表明TaVPEI-1-2A与TaVPEII-6A均可酶切 1Dy10-m619SN;在小麦中过表达TaVPEI-1-2A可显著增强1Dy10-m619SN的翻译后剪切,而过表达TaVPEII-6A则无显著影响。

图1 VPEs是1Dy10-m619SN翻译后剪切的候选酶

图2 小麦种子型VPEs基因的表达特征分析
综上,本研究明确小麦种子型TaVPEI负责1Dy10-m619SN的翻译后剪切,为科学阐释小麦加工品质形成的分子机理提供重要理论参考,为弱筋小麦遗传改良提供全新思路与基因资源。
《The Plant Journal》是国际植物科学领域具有广泛影响力的主流期刊,聚焦植物生理、分子生物学、遗传学、发育生物学等方向的原创研究成果,在全球植物科学研究领域具有重要学术地位。近年来,王琰博士团队在小麦品质形成机理与遗传改良方向持续攻关,取得一系列重要研究进展,为我校作物遗传育种学科建设与高水平科研成果产出提供有力支撑。
(文/图:王琰;初审:李武;复审:陈发军;终审:张楠)